血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎?
1.細(xì)胞生長
我們?cè)诔鰪S前都會(huì)對(duì)血清進(jìn)行一系列質(zhì)檢測(cè)試,確保血清質(zhì)量達(dá)到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。血清測(cè)試和細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)也表明,其沉淀成分不會(huì)影響血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點(diǎn)得到了眾多客戶和其他血清供應(yīng)商的肯定。解凍之后,血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集,形成肉眼可見的沉淀。
2.懷疑污染
磷酸鈣顆粒經(jīng)常會(huì)被當(dāng)成微生物污染而引發(fā)不必要的擔(dān)憂。一般情況下,當(dāng)操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時(shí),常將其存放在4℃冰箱中觀察,并考慮接下來是否繼續(xù)使用。但這樣會(huì)使沉淀進(jìn)一步增多,反而會(huì)使血清更加渾濁,進(jìn)而誤以為存在血清污染。并且,在倒置顯微鏡下,可在血清中觀察到四處游動(dòng)的小黑點(diǎn)(磷酸鈣顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)),更容易使人誤以為存在微生物污染。
為防止這類誤解的產(chǎn)生,我們不建議客戶培養(yǎng)血清來驗(yàn)證是否存在污染,而是將血清直接接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),以觀察是否有細(xì)菌的增殖。并且,進(jìn)行革蘭氏染色,并在油鏡(100X10倍)下觀察可直接確認(rèn)是否存在微生物污染。
怎樣操作可以盡量避免沉淀出現(xiàn)?
1.正確解凍
首先,應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清:從-20℃取出后,置于4℃冰箱緩慢解凍,最后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或37℃水浴解凍,則非常容易產(chǎn)生沉淀。在解凍過程中,請(qǐng)注意時(shí)不時(shí)緩慢搖晃瓶子,減少沉淀的產(chǎn)生。為避免反復(fù)凍融,建議您將血清分裝使用。
2.使用和保存注意事項(xiàng)
血清沉淀很難預(yù)測(cè)和避免,出現(xiàn)沉淀后也無需擔(dān)憂,這并不會(huì)影響血清的品質(zhì)。已知血清沉淀在以下條件下會(huì)有增多的可能:
1)熱滅活;
2)37℃培養(yǎng);
3)反復(fù)凍融;
4)伽馬射線照射;
5)2-8℃長期保存;
6)長期保存于可自動(dòng)化霜的冰箱中(溫度不穩(wěn)定)。
血清沉淀的形成機(jī)理多種多樣,具體的機(jī)理尚不十分明確。我們尚不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)和控制血清沉淀的產(chǎn)生。目前市面上所有品牌的血清產(chǎn)品都存在沉淀現(xiàn)象,這一點(diǎn)可以在各品牌*網(wǎng)站上關(guān)于沉淀問題的聲明上得到證實(shí)。